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Thermolabile Uracil-DNA Glycosylase

Thermolabile Uracil-DNA Glycosylase

基因工程热敏UDG

*若您需要这支酶的表达载体和菌株,可以联系我们。

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基因工程热敏UDG

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产品编号

产品名称

包装

P2072

Thermolabile Uracil-DNA   Glycosylase (1U/μl)

100/500U

  

产品简介:

来源于大肠杆菌Uracil-DNA Glycosylase (UDG)基因工程热敏酶,在50℃孵育10分钟可以迅速不可逆灭活。。

催化含尿嘧啶的DNA链中的尿嘧啶(dU)碱基和脱氧核糖之间的N-糖苷键水解,释放游离尿嘧啶。

可水解含有dU的单链或双链DNA,但不能水解RNA或含有dU的长度不超过6个碱基DNA寡聚体。

用于消除PCR扩增过程中的产物污染问题。其原理为:在PCR反应中以dUTP替代dTTP,形成含dU碱基的PCR扩增产物;后续PCR反应前,使用UDG酶选择性切割可能被污染而带入的之前PCR扩增产生的含有dU的单链或双链DNA,从而避免之前的PCR扩增产物可能的污染对于本次PCR扩增带来的负面影响。于37℃60分钟内催化完成1 nmole AMP掺入到多聚核苷酸中所需要的酶量定义为1个活性单位。

SP6启动子序列:5′-ATTTAGGTGACACTATAG-3′,下划线标注的G为转录起始碱基。

  

使用说明:

反应体系:解冻并彻底混匀各组分,设置如下反应体系。

Component

20μl reaction

Final Concentration

10X SP6 RNA Polymerase   Buffer

2μl

1X

NTP Mixture (10mM each)

1μl

0.5mM each

线性DNA模板

1μg


RNase Inhibitor(可选)

0.5μl

1U/μl

SP6 RNA Polymerase

2μl

40U

Nuclease-free water

Up to 50µl


轻轻混匀后短暂离心,于37℃孵育1-2小时。取1μl转录产物于1%琼脂糖电泳分析。

短的转录本反应可以适当延长孵育时间至2-16小时。

1µg模板DNA可合成超过10µgRNA,提高NTP浓度至4mM/MgCl220mM可以提高RNA产量。

注意事项:

酶取用时宜保存于冰盒内,使用完即放回-20ºC保存。

仅限于专业人员科研用,严禁用于临床诊断或治疗,食品或药品,不得存放于普通住宅内。

请穿戴实验服和一次性手套操作。