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高保真链置换聚合酶
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包装内容:
产品编号 | 产品名称 | 包装 |
P2007 | Bst HF DNA Polymerase (8U/μl) | 2000U |
K1002 | dNTP (10mM each) | 1ml |
K1004 | MgSO4 (100mM each) | 0.5ml |
B2007 | 10X Bst HF Reaction Buffer | 1ml |
产品简介:
基于嗜热脂肪芽孢杆菌(Bacillus stearothermophilus, Bst) DNA Polymerase I
大片段基因工程蛋白,具有5'→3' DNA聚合酶活性,不具有3'→5'和5'→3'的核酸外切酶活性。具有很强的链置换(strand displacement)能力。
适用于环介导的等温扩增(Loop-mediated isothermal amplification, LAMP),链置换DNA合成以及微量DNA/高GC区域DNA测序反应。
具备更快的扩增速度,产量,耐盐性和热稳定性。
在65℃、30分钟内催化完成25nmole dNTP掺入到酸不溶性物质所需要的酶量定义为1个活性单位。
无外源核酸酶活性。
使用说明:
LAMP等温扩增反应体系
Component | 25μl reaction | Final Concentration |
10X Bst HF Reaction Buffer | 2.5µl | 1X (contains 2mM MgSO4) |
MgSO4 (100mM) | 1.5µl | 6mM (8mM total) |
dNTP Mix (10mM) | 3.5µl | 1.4mM each |
FIP/BIP Primers (25X) | 1µl | 1.6µM |
F3/B3 Primers (25X) | 1µl | 0.2µM |
Loop F/B Primers (25X) | 1µl | 0.4µM |
Bst HF DNA Polymerase (8U/μl) | 1µl | 8U |
DNA Sample | variable | > 10 copies or more |
Nuclease-free Water | to 25µl |
轻轻混匀后短暂离心,65ºC孵育30-60分钟。
引物设计参考http://primerexplorer.jp/lampv5e/index.html或者https://lamp.neb.com/#!/
Loop引物不是LAMP反应必需的,但是使用Loop引物可以缩短约1/3扩增时间。
建议设置无模板对照反应以确保扩增的特异性。
优化反应可调整Mg2+浓度(4-10mM),酶量(1-8U)或反应温度(50-68ºC)。
严格遵守PCR实验室操作规程,避免发生污染。