UltraScript Reverse Transcriptase

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包装内容：

产品简介：

来源于莫洛尼（氏）鼠白血病病毒，RNA依赖的DNA聚合酶。经基因改造具备极低RNase H活性，极高热稳定性(42~65℃)。

耐受多种抑制剂，广泛兼容临床样本。

适用于长片段cDNA合成，灵敏度高（≥10pg）。

在37℃、以poly(A)/oligo(dT)为底物10分钟内催化完成1nmole dTTP掺入到酸不溶性物质所需要的酶量定义为1个活性单位。

无外源核酸酶活性，无宿主DNA/RNA。

使用说明：

反应体系：解冻并彻底混匀各组分，于冰浴设置如下反应体系。

彻底混匀后短暂离心。42-65℃孵育15-60分钟，80℃失活10分钟终止反转录反应。如果使用随机引物，先在25ºC孵育10分钟。

反转录产物PCR扩增没有特异性条带的可能原因与建议：

1.      建议使用内参基因做对照。

2.      RNA模板降解，可以通过琼脂糖凝胶电泳分析总RNA质量。严格遵守RNA操作要求避免发生降解。

3.      RNA纯度低，存在抑制反转录反应残余成分，建议使用Trizol或柱纯化。

4.      RNA模板量不足，建议更换模板来源或DNase I去除DNA干扰。

5.      对于长片段cDNA反转录不建议使用热失活方法终止反应，可能会导致产物断裂。此时可以考虑酚氯仿抽提或柱纯化方法。

6.      对于复杂模板如高GC含量或二级结构，可以适当提高反应温度至45-50℃。

7.      某些情况可能需要去除cDNA互补RNA，可以加1ul (2U) RNase H在37℃孵育20分钟。