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耐盐浓度高达300 mM
*若您需要这支酶的表达载体和菌株,可以联系我们。
-20℃储存,<0℃运输。
包装内容:
产品编号 | 产品名称 | 包装 |
P2014 | salt T4 DNA Ligase (400U/μl) | 20000U |
B2011 | 10X T4 DNA Ligase Buffer | 200μl |
B2014 | 10X Stick T4 DNA Ligase Buffer | 200μl |
产品简介:
基于细菌噬菌体T4 gene30的基因工程耐盐DNA连接酶。
在盐浓度高达300 mM的情况下仍能有效连接粘性末端,不会丧失任何活性。
催化DNA双螺旋或DNA/RNA杂合双链中平滑末端、粘性末端以及单链切刻连接反应。
DNA片段黏性末端或平末端连接,对单链核酸无活性。
T4 DNA连接酶需要ATP作为辅因子。
可用于克隆限制性内切酶生成的DNA片段/PCR产物、双链寡核苷酸连接子或接头与DNA 相连等。
26℃温浴30min内完成HindⅢ酶切完全的λDNA (6µg)产物的50%连接反应所需要的酶量定义为1个活性单位。
使用说明:
反应体系:解冻并彻底混匀各组分,于冰浴设置如下反应体系。
Component | 20μl reaction |
10X T4 DNA Ligase Buffer | 2μl |
Vector DNA | 0.02pmole |
Insert DNA | 0.06pmole |
salt T4 DNA Ligase | 1μl |
Nuclease-free water | Up to 20µl |
粘性末端连接可于室温孵育10分钟。
平末端或单碱基overhang应使用10X Stick T4 DNA Ligase Buffer缓冲液代替。切勿通过加热来终止Stick T4 DNA Ligase Buffer中的反应,因为其中的PEG分子受热会抑制随后的转化反应。
取1-5μl连接产物转化感受态。为提高转化效率,可以预冷产物、柱纯化或酚氯仿抽提纯化DNA。