M-MLV Reverse Transcriptase RNase H-, mutant

-20℃储存，<0℃运输。

包装内容：

产品简介：

来源于莫洛尼（氏）鼠白血病病毒RNA依赖的DNA聚合酶，经点突变消除其RNase H活性，热稳定性更高，从而使全长cDNA 产量更高，可用于长mRNA（>5kb）为模板的cDNA合成。

与RNase H缺失突变酶相比，这一突变体的cDNA产量更高。

在37℃、10分钟内催化完成1nmole dNTP掺入到酸不溶性物质所需要的酶量定义为1个活性单位。

无外源核酸酶活性，无宿主DNA/RNA。

使用说明：

反应体系

轻轻混匀后短暂离心。如果使用Oligo(dT)_12-18，40ºC先行孵育10分钟；如果使用随机引物，室温先行孵育10分钟；然后在40-55℃孵育50分钟。如果使用基因特异性引物，在40-55℃一步孵育60分钟即可。

70℃孵育15分钟可以终止反转录反应。

反转录产物PCR扩增没有特异性条带的可能原因与建议：

1.      建议使用内参基因做对照。

2.      RNA模板降解，可以通过琼脂糖凝胶电泳分析总RNA质量。严格遵守RNA操作要求避免发生降解。

3.      RNA纯度低，存在抑制反转录反应残余成分，建议使用Trizol或柱纯化。

4.      RNA模板量不足，建议更换模板来源或DNase I去除DNA干扰。

5.      对于长片段cDNA反转录不建议使用热失活方法终止反应，可能会导致产物断裂。此时可以考虑酚氯仿抽提或柱纯化方法。

6.      对于复杂模板如高GC含量或二级结构，可以适当提高反应温度至45-50℃。

7.      某些情况可能需要去除cDNA互补RNA，可以加1ul (2U) RNase H在37℃孵育20分钟。