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链置换聚合酶
*若您需要这支酶的表达载体和菌株，可以联系我们。
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包装内容：
产品编号 | 产品名称 | 包装 |
P2006 | Bst DNA Polymerase, Large Fragment (8U/μl) | 2000U |
K1002 | dNTP (10mM each) | 1ml |
K1004 | MgSO4 (100mM each) | 0.5ml |
B2006 | 10X Bst LF Reaction Buffer | 1ml |
产品简介：
来源于嗜热脂肪芽孢杆菌(Bacillus stearothermophilus, Bst) DNA Polymerase I Large Fragment，具有5'→3' DNA聚合酶活性，不具有3'→5'和5'→3'的核酸外切酶活性。具有很强的链置换(strand displacement)能力。可用于核酸等温扩增，如环介导的等温扩增(Loop-mediated isothermal amplification, LAMP)和链置换DNA合成(strand displacement amplification, SDA)等。
Bst DNA Polymerase, Large Fragment介导的等温扩增温度一般在50-68℃之间，通常为65℃。本产品在进行等温扩增时不具有将dUTP掺入DNA的能力。
在65℃、30分钟内催化完成10 nmole dNTP掺入到酸不溶性物质所需要的酶量定义为1个活性单位。
无外源核酸酶活性。
使用说明：
LAMP等温扩增反应体系
Component | 25μl reaction | Final Concentration |
10X Bst LF Reaction Buffer | 2.5µl | 1X (contains 2mM MgSO4) |
MgSO4 (100mM) | 1.5µl | 6mM (8mM total) |
dNTP Mix (10mM) | 3.5µl | 1.4mM each |
FIP/BIP Primers (25X) | 1µl | 1.6µM |
F3/B3 Primers (25X) | 1µl | 0.2µM |
Loop F/B Primers (25X) | 1µl | 0.4µM |
Bst DNA Polymerase, Large Fragment (8U/μl) | 1µl | 8U |
DNA Sample | variable | > 10 copies or more |
Nuclease-free Water | to 25µl |
轻轻混匀后短暂离心，65ºC孵育30-60分钟。
引物设计参考http://primerexplorer.jp/lampv5e/index.html或者https://lamp.neb.com/#!/
Loop引物不是LAMP反应必需的，但是使用Loop引物可以缩短约1/3扩增时间。
建议设置无模板对照反应以确保扩增的特异性。
优化反应可调整Mg2+浓度(4-10mM)，酶量(1-8U)或反应温度(50-68ºC)。
严格遵守PCR实验室操作规程，避免发生污染。
