2X Taq PreMix

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包装内容：

产品简介：

Taq DNA Polymerase是最常用的DNA聚合酶，适用于常规PCR和多重PCR。

延伸速率1~2 kb/min，错配率~1×10^-4。

来源于嗜热菌Thermus aquaticus，高度热稳定。

具有5′-3′DNA聚合酶活性，无3′-5′外切酶活性。产物3′端附有一个“A”碱基，可直接用于T/A克隆。

于74℃，30分钟内将10 nmol脱氧核苷酸掺入到酸不溶性物质所需的酶量定义为1个活性单位（U）。

无外源核酸酶活性，无宿主DNA/RNA；蛋白纯度大于99%。

使用说明：

反应体系：解冻并彻底混匀各组分，于冰浴设置如下反应体系。

设置如下热循环程序，开始PCR反应。

常见问题及建议

1.      严格设置阳性对照和阴性对照。

2.      引物设计

（1）    建议使用专业软件如Oligo或Primer，引物长度15-30碱基，GC含量40-60%，T_m值接近。

（2）    避免形成引物自身或引物间二聚体。

（3）    避免引物3’端连续3个及以上G或者C导致非特异性扩增。

3.      无产物

（1）    酶失活或未加入酶。

（2）    模板含有杂质，改善纯化方法。

（3）    蛋白酶/核酸酶污染，反应前体系95℃加热5-10分钟。

（4）    退火温度不佳，建议进行梯度退火PCR优化。

（5）    引物浓度太低，适当增加浓度范围0.05-1μM。

（6）    引物设计不佳，需要考虑GC含量、二级结构、二聚体、退火温度、长度、特异性等因素重新设计合成引物。

（7）    反应条件欠佳，适当优化Mg²⁺浓度，增加循环数。

4.      产物少

（1）    退火温度不佳，建议进行温度梯度PCR优化。

（2）    DNA模板量太少，予以适当增加。

（3）    PCR循环数不足，增加循环次数。

（4）    引物量不足，增加体系引物浓度。

（5）    延伸时间太短，适当增加延伸时间。

（6）    变性时间过长会导致DNA聚合酶失活，适当调整。

（7）    DNA模板中存在抑制剂，确保DNA模板干净。

5.      非特异性扩增

（1）    引物浓度高，特异性差。重新设计合成或降低引物终浓度。

（2）    循环的次数过多。适当增加模板量，减少循环次数。

（3）    酶的用量偏高或酶的质量不好，降低酶量或使用高质量的聚合酶。

（4）    退火温度偏低，退火及延伸时间偏长。应提高退火温度，减少变性与延伸时间。

（5）    Mg²⁺浓度不佳，适当进行梯度浓度PCR优化。

（6）    复制提前终止，当使用非热启动的聚合酶时常见；应在冰上准备反应或采用热启动聚合酶。

（7）    模板量过多，适当调整。

（8）    外源DNA污染，建议重新纯化。