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DNA切刻酶/聚合酶介导的核酸等温扩增
*若您需要这支酶的表达载体和菌株,可以联系我们。
-20℃储存,干冰运输。
包装内容:
产品编号 | 产品名称 | 包装 |
P40041 | HDA Enzyme Mix | 0.5ml |
B40042 | 10X SDA Reaction Buffer | 0.5ml |
K1002 | dNTP (10mM each) | 150µl |
产品简介:
依赖于切刻酶以及链置换聚合酶活性,实现核酸等温指数扩增;
扩增产物长度通常<100bp;
配合荧光染料或者探针,可用于实时扩增检测。
使用说明:
室温设置SDA反应体系如下:
Component | 30μl reaction | Final Concentration |
10X SDA Reaction Buffer | 3µl | 1X |
dNTP (10mM each) | 1.2µl | 0.4mM |
F Bump Primer (1µM) | 1.5µl | 50nM |
R Bump Primer (1µM) | 1.5µl | 50nM |
F SDA Primer (10µM) | 1.5µl | 500nM |
R SDA Primer (10µM) | 1.5µl | 500nM |
DNA template | 1µl | |
SDA Enzyme Mix | 5µl | |
H2O | 13.8µl |
吹吸均匀后短暂离心收集于管底,于55ºC孵育15-60分钟。
10X SDA Reaction Buffer | |
Tris-HCl (pH7.5) | 350mM |
KCl | 1M |
MgCl2 | 100mM |
常见问题及建议
1. 需严格遵循PCR操作规程以避免模板污染。
2. 反应优化参数:
(1) MgSO4终浓度范围为3-4.5mM;
(2) NaCl终浓度范围为20-50mM;
(3) 引物浓度范围为50-200nM;
3. 引物设计参考环介导等温扩增(LAMP, http://primerexplorer.jp/lampv5e/index.html或者https://lamp.neb.com/#!/)。建议使用F3/B3引物作为Bump引物;F2/B2序列作为SDA引物模板靶向区,并在其5’末端加上BstNBI识别位点和4个A碱基的spacer序列。
4. 可配合荧光染料和探针进行实时检测。