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Strand Displacement Amplification Kit

Strand Displacement Amplification Kit

DNA切刻酶/聚合酶介导的核酸等温扩增

*若您需要这支酶的表达载体和菌株,可以联系我们。

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DNA切刻酶/聚合酶介导的核酸等温扩增

*若您需要这支酶的表达载体和菌株,可以联系我们。


-20℃储存,干冰运输。

 

包装内容:

产品编号

产品名称

包装

P40041

HDA Enzyme Mix

0.5ml

B40042

10X SDA Reaction Buffer

0.5ml

K1002

dNTP (10mM each)

150µl

 

产品简介:

依赖于切刻酶以及链置换聚合酶活性,实现核酸等温指数扩增;

扩增产物长度通常<100bp

配合荧光染料或者探针,可用于实时扩增检测。

 

使用说明:

室温设置SDA反应体系如下:

Component

30μl reaction

Final Concentration

10X SDA   Reaction Buffer

3µl

1X

dNTP   (10mM each)

1.2µl

0.4mM

F Bump Primer (1µM)

1.5µl

50nM

R Bump Primer (1µM)

1.5µl

50nM

F SDA Primer (10µM)

1.5µl

500nM

R SDA Primer (10µM)

1.5µl

500nM

DNA template

1µl


SDA Enzyme Mix

5µl


H2O

13.8µl


吹吸均匀后短暂离心收集于管底,于55ºC孵育15-60分钟。

 

10X SDA   Reaction Buffer


Tris-HCl   (pH7.5)

350mM

KCl

1M

MgCl2

100mM

  

常见问题及建议

1.      需严格遵循PCR操作规程以避免模板污染。

2.      反应优化参数:

(1)    MgSO4终浓度范围为3-4.5mM

(2)    NaCl终浓度范围为20-50mM

(3)    引物浓度范围为50-200nM

3.      引物设计参考环介导等温扩增(LAMP, http://primerexplorer.jp/lampv5e/index.html或者https://lamp.neb.com/#!/)。建议使用F3/B3引物作为Bump引物;F2/B2序列作为SDA引物模板靶向区,并在其5’末端加上BstNBI识别位点和4A碱基的spacer序列。

4.      可配合荧光染料和探针进行实时检测。