感受态细胞名称：Tuner(DE3)pLysS competent cells；Tuner(DE3)pLysS感受态细胞

菌种类型：E.coli

培养基：LB培养基

产品规格：10×100μl

转化效率：1~5 × 10⁷ cfu/µg pUC19

基因型：F^– ompT hsdS_B (r_B^– m_B^–) gal dcm lacY1(DE3) pLysS (Cam^R)

抗性：氯霉素

转化条件：42 ℃热激

培养条件：37 ℃,  有氧

用途：蛋白表达

储存条件：-80 ℃保存，干冰运输

特点和简介

n  lacY1基因 (半乳糖苷透性酶基因)突变赋予其Tuner菌株的优点——IPTG以均一速度进入体系中大肠杆菌的每个细胞，产生更加严格、均一的浓度依赖；

n  与pET系列载体联合使用，可以使得蛋白表达从低表达水平到超高表达水平进行有效调节。蛋白表达水平低的情况下，目的蛋白可能会具有更好的可溶性和生理活性；

n  Tuner系列菌株还是细胞质Lon蛋白酶和和胞外膜上OmpT蛋白酶缺陷菌株，有效减少目的蛋白降解；

n  DE3是溶源性的λDE3, 所以在lacUV5启动子下携带有T7 RNA聚合酶的染色体拷贝。该菌株适用于pET系列载体，及其他T7启动子系列载体。同时表达T7 RNA 聚合酶和大肠杆菌RNA 聚合酶，可用于pET 系列，pGEX，pMAL 等质粒的蛋白表达；

n  含有pLysS质粒，pLysS质粒能够产生T7溶菌酶，可以有效降低目的基因的基础表达水平。pLysS质粒使得该菌株具有氯霉素抗性。pLysS质粒的起始复制位点是p15 Origin, 这使得该质粒能够和pUC-及pBR322-衍生的质粒互相共存。

简化转化步骤

1.         取Tuner(DE3)pLysS感受态细胞置于冰浴融化。

2.         加入质粒DNA (1~100 ng），轻弹混匀，冰浴静置30分钟。

3.         42 ℃水浴热激90秒，快速转移至冰浴静置冷却3分钟。

4.         加入无抗培养基（SOC或LB），混匀后37 ℃，225rpm摇床振荡培养45分钟。

5.         取100μl培养物均匀涂布至对应抗性的琼脂培养板。37 ℃倒置培养12-16小时。

注意：如果必要可以离心（4000 rpm，3分钟）收集所有菌体，吹打悬浮后涂布平板。

注意事项

1.         -80 ℃保存，避免反复冻融和放置时间过长。

2.         感受态细胞最好在冰中缓慢融化，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。进行转化操作时，应根据相应的温度及无菌条件的要求进行。转化物的体积不能超过感受态细胞体积的1/10。

3.         混入质粒时应轻柔操作。

4.         最佳诱导时间，温度，IPTG浓度需实验优化。

5.         除复苏培养基为无抗生素外，其余所用培养基、培养液均应含有34 µg/ml氯霉素，以防质粒丢失。