感受态细胞名称：Rosetta(DE3) pLysS competent cells；Rosetta(DE3) pLysS感受态细胞

菌种类型：E.coli

培养基： LB培养基

产品规格：10×100μl

转化效率：1~5 × 10⁷ cfu/µg pUC19

基因型：F^-ompT hsdS_B(r_B^- m_B^-) gal dcm (DE3) pLysSRARE (Cam^R)

抗性：氯霉素

转化条件：42 ℃热激

培养条件：37 ℃,  有氧

用途：蛋白表达

储存条件：-80 ℃保存，干冰运输

特点和简介

n  细胞质Lon蛋白酶和和胞外膜上OmpT蛋白酶缺陷，有效减少目的蛋白降解；

n  Rosetta(DE3)菌株具有氯霉素抗性，补充大肠杆菌缺乏的6种稀有密码子(AUA, AGG, AGA, CUA, CCC, GGA)对应的tRNA，提高外源基因，尤其是真核基因在原核系统中的表达水平；

n  λ噬菌体DE3溶原化衍生菌株，IPTG可以诱导在lacUV5启动子控制噬菌体T7 RNA聚合酶表达；

n  适合IPTG诱导的T7启动子载体，常用的pET系列载体；

n  携带pLysS质粒，具有氯霉素抗性，可以表达能降解T7 RNA聚合酶的T7溶菌酶，从而抑制T7 RNA聚合酶及目的蛋白本底表达。

简化转化步骤

1.         取Rosetta(DE3) pLysS感受态细胞置于冰浴融化。

2.         加入质粒DNA (1~100 ng），轻弹混匀，冰浴静置30分钟。

3.         42 ℃水浴热激45秒，快速转移至冰浴静置冷却3分钟。

4.         加入无抗培养基（SOC或LB），混匀后37 ℃，225rpm摇床振荡培养45分钟。

5.         取100μl培养物均匀涂布至对应抗性的琼脂培养板。37 ℃倒置培养12-16小时。

注意：如果必要可以离心（4000 rpm，3分钟）收集所有菌体，吹打悬浮后涂布平板。

注意事项

1.         -80 ℃保存，避免反复冻融和放置时间过长。

2.         感受态细胞最好在冰中缓慢融化，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。进行转化操作时，应根据相应的温度及无菌条件的要求进行。转化物的体积不能超过感受态细胞体积的1/10。

3.         混入质粒时应轻柔操作。

4.         最佳诱导时间，温度，IPTG浓度需实验优化。

5.         除复苏培养基为无抗生素外，其余所用培养基、培养液均应含有34 µg/ml氯霉素，以防质粒丢失。