感受态细胞名称：XL10-Gold Competent Cells；XL10-Gold感受态细胞

菌种类型：E.coli

培养基：LB培养基

产品规格：10×100μl

转化效率：1~5 × 10⁹ cfu/µg pUC19

基因型：Tet^rΔ(mcrA)183  Δ(mcrCB-hsdSMR-mrr)173 endA1 supE44 thi-1 recA1  gyrA96 relA1 lac Hte [F´proAB lacI^qZΔM15 Tn10  (Tet^r) Amy Cam^r]

抗性：四环素，氯霉素

转化条件：42 ℃热激

培养条件：37 ℃,  有氧

用途：克隆菌株，cDNA文库的构建

储存条件：-80 ℃保存，干冰运输

特点和简介

n  XL10-Gold是目前转化效率最高的感受态细胞；

n  [Δ(mcrA)183 Δ(mcrCB-hsdSMR-mrr)173]赋予XL10-Gold缺失几乎所有已知的限制酶切系统；

n  同时缺失核酸内切酶(endA)，提高了质粒DNA的产量和质量；重组酶缺陷型(recA)减少插入片段的同源重组概率，保证了插入DNA的稳定性；

n  lacIqZΔM15的存在使XL10-Gold可用于蓝白斑筛选；

n  Hte表型，DNA连接产物的转化效率提高20倍至30倍；

n  可降低对较大质粒的偏差，并为更具代表性的文库产生更多菌落，是构建质粒文库的理想选择。

简化转化步骤

1.         取XL10-Gold感受态细胞置于冰浴融化。

2.         加入质粒DNA (1~100 ng），轻弹混匀，冰浴静置25分钟。

3.         42 ℃水浴热激35秒，快速转移至冰浴静置冷却2分钟。

4.         加入无抗培养基（SOC或LB），混匀后37 ℃，225rpm摇床振荡培养60分钟。

5.         取100μl培养物均匀涂布至对应抗性的琼脂培养板。37 ℃倒置培养12-16小时。

注意：如果必要可以离心（4000 rpm，3分钟）收集所有菌体，吹打悬浮后涂布平板。

注意事项

1.         -80 ℃保存，避免反复冻融和放置时间过长.

2.         感受态细胞最好在冰中缓慢融化，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。进行转化操作时，应根据相应的温度及无菌条件的要求进行。转化物的体积不能超过感受态细胞体积的1/10。

3.         混入质粒时应轻柔操作。

4.         XL10-Gold菌株对<40 µg/ml氯霉素有抗性，但对100 µg/ml氯霉素敏感。