感受态细胞名称：HB101 competent cells；HB101感受态细胞

菌种类型：E.coli

培养基： 2YT或LB培养基。

产品规格：10×100μl

转化效率：>5 × 10⁸ cfu/µg pUC19

基因型：F^- mcrB mrr hsdS20(r_B^- m_B^-) recA13 leuB6 ara-14 proA2 lacY1 galK2 xyl-5 mtl-1rpsL20((str^R) glnV44λ^-

抗性：链霉素

转化条件：42 ℃热激

培养条件：37 ℃,有氧

用途：可抑制长片段末端重复区重组克隆感受态

储存条件：-80 ℃或者更低温度保存，避免反复冻融

特点和简介

n  HB101菌株是E. Coli K12菌株和E. Coli B菌株的杂合产物（同时也是Stbl3的原始菌株）；

n  recA13突变可有效抑制长片段末端重复区的重组，降低错误重组的概率；

n  hsdS20背景使HB101缺失内切酶系统，增强了外源DNA的稳定性和提取质量；

n  此菌株具有链霉素抗性；

n  不存在lacIqZΔM15，不可用于蓝、白斑筛选。

简化转化步骤

1.         取HB101感受态细胞置于冰浴融化。

2.         加入质粒DNA (1~500 ng），轻弹混匀，冰浴静置30分钟。

3.         42 ℃水浴热激90秒，快速转移至冰浴静置冷却3分钟。

4.         加入无抗培养基（SOC或LB），混匀后37 ℃，225rpm摇床振荡培养45 分钟。

5.         取100μl培养物均匀涂布至对应抗性的琼脂培养板。37 ℃倒置培养12-16小时。

注意：如果必要可以离心（4000 rpm，3分钟）收集所有菌体，吹打悬浮后涂布平板。

注意事项

1.         -80 ℃保存，避免反复冻融和放置时间过长。

2.         感受态细胞最好在冰中缓慢融化，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。进行转化操作时，应根据相应的温度及无菌条件的要求进行。转化物的体积不能超过感受态细胞体积的1/10。

3.         混入质粒时应轻柔操作。