感受态细胞名称：SHuffle T7 Express lysY competent cells; SHuffle T7 Express lysY感受态细胞

菌种类型：E.coli

培养基：LB或SOC培养基

产品规格：10×100μl

转化效率：1 × 10⁷ cfu/µg pUC19

基因型：MiniF lysY (CamR) / fhuA2 lacZ::T7 gene1 [lon] ompT ahpC gal λatt::pNEB3-r1-cDsbC (SpecR, lacIq) ΔtrxB sulA11 R(mcr-73::miniTn10--TetS)2 [dcm] R(zgb-210::Tn10 --TetS) endA1 Δgor Δ(mcrC-mrr)114::IS10

抗性：Nitrofurantoin, Spectinomycin, Chloramphenicol, Streptomycin (低水平抗性)

转化条件：42 ℃热激

培养条件：37 ℃,  有氧

用途：非毒性和毒性蛋白表达

储存条件：-80 ℃保存，干冰运输

特点和简介

n  工程化大肠杆菌B菌株，携带有二硫键异构酶DsbC，促进蛋白正确折叠；

n  携带有染色体T7聚合酶基因以及外源溶菌酶基因，适合IPTG诱导的T7启动子载体，如常用的pET系列载体；

n  细胞质Lon蛋白酶和和胞外膜上OmpT蛋白酶缺陷，有效减少目的蛋白降解；

简化转化步骤

1.         取SHuffle T7 Express lysY感受态细胞置于冰浴融化。

2.         加入质粒DNA (1~100 ng），轻弹混匀，冰浴静置30分钟。

3.         42 ℃水浴热激30秒，快速转移至冰浴静置冷却5分钟。

4.         加入无抗培养基（SOC或LB），混匀后于30 ℃，225rpm摇床振荡培养60分钟。

5.         取100μl培养物均匀涂布至对应抗性的琼脂培养板。30℃倒置培养过夜。

注意：必要时可以系列稀释菌体，吹吸均匀后涂布平板。

注意事项

1.         -80 ℃保存，避免反复冻融和放置时间过长。

2.         感受态细胞最好在冰中缓慢融化，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。；进行转化操作时，应根据相应的温度及无菌条件的要求进行。转化物的体积不能超过感受态细胞体积的1/10。

3.         混入质粒时应轻柔操作。

4.         最佳诱导时间，温度，IPTG浓度需实验优化。