感受态细胞名称：ER2566 competent cells; ER2566感受态细胞

菌种类型：E.coli

培养基：LB或SOC培养基

产品规格：10×100μl

转化效率：1~5 X 10⁸ cfu/µg pUC19

基因型：fhuA2 lacZ::T7 gene1 [lon] ompT gal sulA11 R(mcr-73::miniTn10--TetS)2 [dcm] R(zgb-210::Tn10--TetS) endA1 Δ(mcrC-mrr)114::IS10

抗性：Nitrofurantoin

转化条件：42 ℃热激

培养条件：37 ℃,  有氧

用途：非毒性和毒性蛋白表达

储存条件：-80 ℃保存，干冰运输

特点和简介

n  BL21的K-12部分基因组嵌合菌株；耐受非特异性核酸酶所引起的DNA损伤，常用于表达限制性内切酶、核酸酶以及DNA聚合酶等重组蛋白；

n  Lac调控T7 RNA聚合酶位，适用于IPTG诱导表达系统(如pET系列)；

n  细胞质Lon蛋白酶和和胞外膜上OmpT蛋白酶缺陷，有效减少目的蛋白降解；

n  fhuA2赋予菌株对噬菌体T1的抗性；

n  Δ(mcrC-mrr)114，mcr-73突变取消对甲基化DNA限制；

简化转化步骤

1.         取ER2566感受态细胞置于冰浴融化。

2.         加入质粒DNA (1~100 ng），轻弹混匀，冰浴静置30分钟。

3.         42 ℃水浴热激10秒，快速转移至冰浴静置冷却5分钟。

4.         加入无抗培养基（SOC或LB），混匀后于37 ℃，225rpm摇床振荡培养60分钟。

5.         取100μl培养物均匀涂布至对应抗性的琼脂培养板。37℃倒置培养过夜。

注意：必要时可以系列稀释菌体，吹吸均匀后涂布平板。

注意事项

1.         -80 ℃保存，避免反复冻融和放置时间过长。

2.         感受态细胞最好在冰中缓慢融化，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。；进行转化操作时，应根据相应的温度及无菌条件的要求进行。转化物的体积不能超过感受态细胞体积的1/10。

3.         混入质粒时应轻柔操作。

4.         最佳诱导时间，温度，IPTG浓度需实验优化。