感受态细胞名称：Stbl3 competent cell；Stbl3感受态细胞

菌种类型：E.coli

培养基： LB或SOC培养基

产品规格：10×100μl

转化效率：1~5 × 10⁸ cfu/µg pUC19

基因型：F^-mcrB mrr hsdS20(r_B^-, m_B^-) recA13 supE44 ara-14 galK2 lacY1 proA2 rpsL20(Str^R) xyl-5 λ-leu mtl-1

抗性：链霉素

转化条件：42 ℃热激

培养条件：37 ℃,  有氧

用途：克隆慢病毒表达载体中的直接重复序列

储存条件：-80 ℃保存，干冰运输

特点和简介

n  Stbl3感受态细胞来源于 HB101 E. coli strain，是慢病毒载体系统推荐使用的菌株；

n  能够降低在慢病毒表达载体和其他逆转录病毒载体中发现的长末端重复片段 (LTR) 的同源重组频率；

n  本菌株非常稳定，和常见的大肠杆菌菌株相比，对于慢病毒载体等较大质粒或其它不稳定载体的转化效率以及克隆和扩增的稳定性有显著提高；

n  基因组克隆容量增强 (mcrB, mrr)；

n  菌株具有链霉素抗性，不可用于蓝、白斑筛选；

n  生长速度快，8-10小时可见克隆。

简化转化步骤

1.         取Stbl3感受态细胞置于冰浴融化。

2.         加入质粒DNA (1~100 ng），轻弹混匀，冰浴静置30分钟。

3.         42 ℃水浴热激90秒，快速转移至冰浴静置冷却3分钟。

4.         加入无抗培养基（SOC或LB），混匀后37 ℃，225rpm摇床振荡培养45分钟。

5.         取100μl培养物均匀涂布至对应抗性的琼脂培养板。37 ℃倒置培养12-16小时。

注意：如果必要可以离心（4000 rpm，3分钟）收集所有菌体，吹打悬浮后涂布平板。

注意事项

1.         对不稳定DNA 片段的克隆或逆转录病毒/慢病毒载体的构建，涂板后应在30℃培养，以减少发生错误重组的概率。

2.         制备高纯度病毒质粒时，应使用新鲜转化的平板接菌，新鲜菌液提取质粒，菌液不可低温保存后使用。

3.         对不稳定的克隆或病毒质粒优先以质粒状态保存，尽量避免将质粒保存在大肠杆菌细胞中。

4.         S.O.C.或LB 培养基均可使用，S.O.C.可提高转化效率20%；实验人员可选择在37℃或30℃培养细胞。37℃条件下，菌生长速度加快，有利于提高质粒产量；30℃培养可降低错误重组概率。

5.         感受态细胞最好在冰中缓慢融化。插入冰中8 分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。混入目的DNA 时应轻柔操作。转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。