感受态细胞名称：JM110 competent cells；JM110感受态细胞

菌种类型：E.coli

培养基： LB或SOC培养基

产品规格：10×100μl

转化效率：1~5 × 10⁷ cfu/µg pUC19

基因型：rpsL (Str^R) thr leu thi-1 lacY galK galT ara tonA tsx dam dcm supE44 Δ(lac-proAB) /F′ [traD36 proAB lacI^qZΔM15]

抗性：链霉素。

转化条件：42 ℃热激

培养条件：37 ℃,  有氧

用途：用于制备无甲基化DNA的常规克隆感受态

储存条件：-80 ℃保存，干冰运输

特点和简介

n  JM110菌株具有硫酸链霉素抗性(StrR)；

n  甲基化基因dam、dcm缺失的菌株，提取得到的质粒DNA，可被对dam、dcm甲基化敏感的内切酶切割；

n  lacI^qlacZΔM15的存在使JM110可以进行蓝白斑筛选，但转化效率不高，一般不用于质粒构建，只适用于质粒转化；

n  用于制备无甲基化DNA的高质量感受态细胞。

简化转化步骤

1.         取JM110感受态细胞置于冰浴融化。

2.         加入质粒DNA (1~100 ng），轻弹混匀，冰浴静置30分钟。

3.         42 ℃水浴热激45秒，快速转移至冰浴静置冷却3分钟。

4.         加入无抗培养基（SOC或LB），混匀后37 ℃，225rpm摇床振荡培养45分钟。

5.         取100μl培养物均匀涂布至对应抗性的琼脂培养板。37 ℃倒置培养12-16小时。

注意：如果必要可以离心（4000 rpm，3分钟）收集所有菌体，吹打悬浮后涂布平板。

注意事项

1.         -80 ℃保存，避免反复冻融和放置时间过长。

2.         感受态细胞最好在冰中缓慢融化，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。进行转化操作时，应根据相应的温度及无菌条件的要求进行。转化物的体积不能超过感受态细胞体积的1/10。

3.         混入质粒时应轻柔操作。

4.         除复苏培养基为无抗生素外，其余所用培养基、培养液均应含有50 µg/ml链霉素。