感受态细胞名称：EPI400 competent cells；EPI400感受态细胞

菌种类型：E.coli

培养基： 2YT或LB培养基。

产品规格：10×100μl

转化效率：1~5 × 10⁷ cfu/µg pUC19

基因型：F^-mcrAΔ(mrr-hsdRMS-mcrBC)Φ80dlacZΔM15ΔlacX74recA1endA1 araD139 Δ(ara, leu)7697galUgalKλ^-rpsL (Str^R)nupGtrfAtonA pcnB4 dhfr

抗性：链霉素

转化条件：42 ℃热激

培养条件：37 ℃,  有氧

用途：诱导型高拷贝质粒菌株

储存条件：-80 ℃保存，干冰运输

特点和简介

n  EPI400菌株来源于EC100菌株，将EC100核基因中可以提高质粒拷贝数的pcnB基因删除后插入一个诱导型启动子驱动的pcnB基因从而构建成EPI100菌株。非诱导情况下，EPI400菌株中的质粒拷贝数低，特别适合于克隆和扩增含有不稳定DNA或毒性基因的质粒；在加入WDEPI诱导剂I后可以提高质粒拷贝数到正常状态；

n  mcrA, Δ(mrr hsdRMS mcrBC)基因型使EPI400菌株适合于克隆富含甲基胞嘧啶或甲基腺嘌呤的DNA；

n  rec A1和end A1的突变有利于插入DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取；

n  lacZΔM15标记的存在使EPI400可用于蓝白斑筛选，ton A赋予其抗噬菌体T1和T5的能力，rpsL赋予其链霉素抗性。

简化转化步骤

1.         取EPI400感受态细胞置于冰浴融化。

2.         加入质粒DNA (1~500 ng），轻弹混匀，冰浴静置30分钟。

3.         42 ℃水浴热激90秒，快速转移至冰浴静置冷却3分钟。

4.         加入无抗培养基（SOC或LB），混匀后37 ℃，225rpm摇床振荡培养45 分钟。

5.         取100μl培养物均匀涂布至对应抗性的琼脂培养板。37 ℃倒置培养12-16小时。

注意：如果必要可以离心（4000 rpm，3分钟）收集所有菌体，吹打悬浮后涂布平板。

注意事项

1.         -80 ℃保存，避免反复冻融和放置时间过长。

2.         感受态细胞最好在冰中缓慢融化，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。进行转化操作时，应根据相应的温度及无菌条件的要求进行。转化物的体积不能超过感受态细胞体积的1/10。

3.         混入质粒时应轻柔操作。