感受态细胞名称：HMS174(DE3) competent cells；HMS174(DE3)感受态细胞

菌种类型：E.coli

培养基： LB培养基。

产品规格：10×100μl

转化效率：1~5 × 10⁷ cfu/µg pUC19

基因型：F^-recA1 hsdR(r_K12^- m_K12⁺) (DE3) (Rif ^R)

抗性：利福平

转化条件：42 ℃热激

培养条件：37 ℃,  有氧

用途：工业级大规模外源蛋白表达

储存条件：-80 ℃保存，干冰运输

特点和简介

n  HMS174感受态细胞来源于K12菌株，含有RecA突变。对于能够导致DE3噬菌体损失的特定基因，该菌株能够稳定表达这种基因；

n  λ噬菌体DE3溶原化衍生菌株，IPTG可以诱导在lacUV5启动子控制噬菌体T7 RNA聚合酶表达；

n  RecA突变使得三种重组途径缺失，外源基因非常稳定；

n  具有完整的乳糖代谢途径，故在诱导蛋白表达时，可以用乳糖同时作为唯一碳源和诱导剂，因此不需要IPTG作为诱导剂，成本比BL21 (DE3)以葡萄糖做碳源，以ITPG做诱导剂的表达模式低，适合工业级大规模表达外源蛋白；

n  该菌株同时具有利福平抗性。

简化转化步骤

1.         取HMS174(DE3)感受态细胞置于冰浴融化。

2.         加入质粒DNA (1~100 ng），轻弹混匀，冰浴静置30分钟。

3.         42 ℃水浴热激90秒，快速转移至冰浴静置冷却3分钟。

4.         加入无抗培养基（SOC或LB），混匀后37 ℃，200rpm摇床振荡培养45分钟。

5.         取100μl培养物均匀涂布至对应抗性的琼脂培养板。37 ℃倒置培养12-16小时。

注意：如果必要可以离心（4000 rpm，3分钟）收集所有菌体，吹打悬浮后涂布平板。

注意事项

1.         -80 ℃保存，避免反复冻融和放置时间过长。

2.         感受态细胞最好在冰中缓慢融化，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。进行转化操作时，应根据相应的温度及无菌条件的要求进行。转化物的体积不能超过感受态细胞体积的1/10。

3.         混入质粒时应轻柔操作。

4.         最佳诱导时间，温度，IPTG浓度需实验优化。